Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的全过程中逐渐扩展

从第一次经常出现口内自身免疫到经常出现1HG冠心病医学征状的实质性率在成年人初就有很好的所述，多个口内自身免疫阳性的成年人之中有70%在血清转换后10年中入院冠心病，而随访15年的成年人这一%-增高到84%。相对来说，占有医学1HG冠心病一半以上的HG1HG冠心病的胃癌选择性还无法得到充分的研究工作。

更为多的人开始常用分期系统设计来定义1HG冠心病的实质性：个体在经常出现多种口内自身免疫时转到第1过渡阶段，经常出现血糖异常时转到第2过渡阶段，经常出现征状时转到第3过渡阶段。一些多发口内自身免疫阳性的个体，在1期和2期，实质性较慢，并发展为胃癌的1HG冠心病。我们以前所述了一一组在首次监测到多种口内自身免疫取样后据估计10年无冠心病的却是慢实质性者，这一组病人人数少，但外观上非常具体。随后，我们发现口内自身特异性特异性CD8+T细胞会反其所在实质性快速的病人之中基本不存在，但在更进一步胃癌和依然存在的冠心病病人之中很很难监测到。这有可能证明，与实质性病人远比，这些病人自身免疫反其所的平衡增强。

最初研究工作证明，尽管平衡性T细胞会(Treg)总数正常，但冠心病病人存在一些功用瑕疵，其之中包括对IL-2的反其所技能提高。此外，冠心病病人之中的效其所CD4+T细胞会有可能对平衡更为重要抵抗性，表现为效其所T细胞会的可抑制移向，共存造成了的Treg和体外造成了的诱发Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞会之中IL-2反其所移向。本研究工作的目的是所述了CD4+平衡性T细胞会(Treg)在一小群却是快速实质性者之中的外观上，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁下述确诊的病人亲属之中检查1HG冠心病的脆弱状况。我们以前所述了依然快速实质性者的外观上，他们保持稳定多重口内自身免疫阳性高达10年，但无法经常出现冠心病的医学征状，慢性或非短暂性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无冠心病并愿意提供大量血浆取样的快速实质性者纳入T和B细胞会功用统计分析。在目前的研究工作之中，8名慢实质性者(SP一组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身免疫阳性。所有的组织者都处于1HG冠心病实质性的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫对某些特异性的阳性反其所，然而，一名病人已经处于2期据估计6年，但无法经常出现医学征状，一名病人被诊断为冠心病，该患者72岁，在挖掘出实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之中对该ADP顺利完成了单独指标。除去外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多变量流式细胞会术和T细胞会可抑制试验车指标ADP之中Treg的阈值、特异性和功用。常用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究工作、表征和回归)顺利完成无都由聚类统计分析，指标Treg特异性。

结果：与健康ADP远比，来自慢实质性体的清醒CD4+T细胞会的都由聚类看出，激活的清醒CD4+ Treg阈值增高，与抗生素诱发的TNFR相关细胞内(GITR)透露增高有关。一名HbA1c升高的病人与实质性快速者和给定的依此一组远比，Treg磬有所相同。功用远比较，与健康ADP远比，来自快速实质性体的Treg介导的CD4+效其所T细胞会可抑制明显受损。表现为对效其所CD4+T细胞会CD25和CD134透露的可抑制增高。

布1 深入的特异性统计分析看出，CD4+Treg亚HG在慢实质性所述符之中增高。由FlowSOM分解成的Treg室，汇聚在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据记号物透露深入研究工作出10个元簇:清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)常用9个相同Treg记号分解成的10个元簇的MST。每个键值都有一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在键值一组一处手工。每个键值之中的饼布透露单个记号的透露级别。(b)每个元聚类的热布，以看出连续性记号透露。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)分解成布，以及FlowSOM辨识的每个元簇的大块。(e-l)相对轻元素为每个metacluster罐直通布(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞会(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞会(l)。绿色红色都有慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一下标秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 常用CITRUS的预测模HG确认，Treg阈值的增高是实质性快速的标志。分级门控(a - f)和果树统计分析(g-k)比较SP组织者和给定的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都有性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR透露顺利完成除去，各种类型FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(杂色)一组以及ADPSP 606(绿色)之中CD25+ cd127的阈值核心内容布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的罐直通布;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3透露强度图例，交叉出彩的簇被辨识为SP和HD所述符之间的相同。(j)罐直通布看出了在SP(杂色)和HD(灰点)一组之中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对轻元素(%-)。(k)直方布看出每个簇的特异性(黑色)和Treg记号相对透露与故事情节透露(白色);上列，CPUTreg_3;下面一路上，CPUTreg_4。故事情节与所有其他簇之中记号的透露有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一下标秩检验

布3 与健康献血者远比，实质性快速者清醒treg的GITR增高。每个清醒CD4+T细胞会元簇(清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个透露记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)所述符的透露热布(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR透露并联，看出直方布(c)和核心内容布(d)。Wilcoxon一对一下标秩和检验，p< 0.07(绿色)所有ADP包括，p< 0.05(白色)ADPSP 606和给定的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR透露，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(绿色)并联，看出直方布(e)和核心内容布(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一下标秩检验

布4 来自快速实质性的CD4+ treg细胞会高度集中效其所CD4+T细胞会的技能提高。SP一组用白色的直通和红色透露，HD一组用黑色的直通和红色透露，绿色的直通/红色透露ADPsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(此番者)被记号为CFSE, Treg按仔细观察的%-试样。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培养出来3天后顺利完成流式细胞会术监测。(a-d)与CD4+此番者相对其所的treg培养出来(诱发)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养出来。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE可抑制%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制%-。常用阳性依此(激活的响其所细胞会都有treg)计算可抑制%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 效其所CD4+T细胞会对快速实质性的T细胞会还原的可抑制更寻常。SP一组用白色的直通和红色透露，HD一组用黑色的直通和红色透露，绿色的直通/红色透露ADPsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel记号，treg按仔细观察的%-试样。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培养出来3天后顺利完成流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培养出来。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE可抑制次之(b)。(c,d) CD25可抑制次之(c)和CD134可抑制次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小出来之中的透露。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出事实的事实是，来自快速实质性子的还原清醒CD4+Treg在GITR透露之中得到了扩大和丰富，强调了再进一步研究工作Treg在1HG冠心病可能性个体之中的异质性的必要性。

译文译文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28